NIBSC 瘦素(WHO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品)

產(chǎn)品時(shí)間：2022-03-04

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NIBSC 97/594 瘦素(WHO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品)被世界衛(wèi)生組織生物標(biāo)準(zhǔn)化專(zhuān)家委員會(huì)在 8 個(gè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的國(guó)際合作研究評(píng)估后于 1999 年確立為瘦素人類(lèi)序列的第一個(gè)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn) (IS)

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世界衛(wèi)生組織國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)

瘦素，人類(lèi)，rDNA 衍生

NIBSC 97/594

酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二.甲酰胺解聚法：破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細(xì)胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
四.異丙醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）
五.表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。
七.堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。

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